Stilling: Evisdom > vitenskap >

Hva er Northern Blot?

Northern blot hybridisering er en teknikk som brukes til å oppdage messenger RNA (mRNA) nivåer i en prøve, og å kvantifisere mengden av mRNA som er til stede. Selv om andre mer kraftfulle teknikker finnes fortsatt nordlige blot standarden på grunn av sin enkelhet og brukervennlighet. Den nordlige blotting teknikken gir også mulighet for direkte sammenligning av flere prøver i ett enkelt eksperiment.

Messenger RNA er en type nukleinsyre som er produsert ved et gen blir uttrykt. Et gen som er slått på og funksjonelle i en celle er transkribert til mRNA. Den mRNA blir deretter transportert til cytoplasma i cellen, der den er oversatt til et protein. Northern blot analyse av et Mobiltlf mRNA prøve kan derfor gi nyttig informasjon om utvalg av proteiner i cellen skal produsere.

I en nordlig blot, mRNA er hentet fra celler og kjøre gjennom en denaturing agarose gel elektroforese, som tillater mRNA i prøven skal skilles etter størrelse. Prøver av mRNA-molekyler av kjente størrelser kjøres samtidig å gi en kontroll. Når electrophoresis er ferdig, blir prøvene overført og immobilisert på en solid membran, vanligvis laget av et materiale, slik som nylon. Prøvene blir deretter utsatt for radiolabeled sonder i flere timer før analyse. Under analysen, mRNA som har hybridisert til en radiolabeled sonde klart kan oppdages ved hjelp av røntgen.

Den nordlige blotting teknikken åpner for observasjon av genuttrykk mønstre mellom forskjellige typer vev. Messenger RNA ekstrahert fra cellene i ulike vev og organ-typene kan sammenlignes, og mobilnettet reaksjoner på stress, infeksjon, og mange andre stimuli kan undersøkes. Ved å se på forskjeller i mRNA uttrykk under forskjellige forhold, kan en vitenskapsmann finne ut hvilke typer proteiner en celle produserer i respons til visse stimuli. Dette kan gi hint om funksjoner av ukjente proteiner, eller i tilfelle av kjente proteiner, informasjon om mobilnettet svar på stimuli i spørsmålet.

For eksempel kan en nordlig blot viser at uttrykk for et ukjent protein øker som respons på nærvær av en bestemt toksin. Det kan da være teori om at proteinet er involvert i å redusere toksisitet, kanskje ved å transportere den kjemiske ut av cellen eller konvertere den til en metabolitt. Hvis kjent proteiner er under eksamen, dokumentere endringer i protein uttrykk kan gi informasjon om svaret selv. Hvis uttrykk for en kjent molekylær transporter var økt, for eksempel, kan det være bekreftet at mobilnettet reaksjon på giftstoffer er å transportere giftstoffer ut av cellen.

----------------------------------
Forholde Artikkelen:
----------------------------------